隐球菌在免疫功能正常和低下的患者中可引起各种感染。新型隐球菌引起的隐球菌脑膜炎（Cryptococcal meningoencephalitis）在隐球菌病中最常见，尤其影响AIDS患者。新型隐球菌最常见的是宿主通过呼吸道吸入隐球菌孢子，引起肺部感染，可能导致播散性感染。隐球菌病的治疗有两性霉素B（AMB）单独治疗，或者与其它抗真菌药物如5-氟胞嘧啶（5FC）或氟康唑（FLC）联合治疗。有研究表明，这些治疗方案的失败率很高。

越来越多的文献报道隐球菌对于唑类抗真菌药的MIC偏高，但对临床治疗的影响仍有争议。隐球菌尚未建立临床折点，但已提出一些抗真菌药物的流行病学cutoff值，以区分野生型（WT）和非野生型（NWT）菌。MIC和临床治疗结果之间的差异可能部分由所用的抗真菌药物敏感性试验解释，因为不同方法之间的MIC可能不同。目前，隐球菌的MIC检测技术有多种，如美国临床和实验室标准研究所（CLSI）和欧洲抗菌药物敏感性检测委员会（EUCAST）推荐的微量肉汤稀释（broth microdilution，BMD）参考方法、使用比色终点的商品化技术（Sensititre YeastOne [SYO] assay）、Etest条、Liofilchem最低抑菌浓度测试条（Liofilchem MIC test strip，MTS）和自动化系统（Vitek 2）。与金标准参考方法相比，这些商品化方法更标准化、有效、简单，易于在临床微生物实验室开展，金标准参考方法繁琐、耗时，仅限于少数使用。因此，评估这些商品化试剂盒测得MIC与参考方法的一致性，至关重要。

作者收集了106株新型隐球菌评估EUCAST、CLSI、MTS和SYO四种方法，评估了它们对AMB、5FC、FLC、伏立康唑（VRC）和伊曲康唑（ISA）体外活性的检测性能和一致性。使用BrukerBiotyper基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱鉴定到种水平。菌株在37℃含氯霉素的SDA上培养48h后，取新鲜菌落制备0.5McF的菌悬液，并稀释至最终接种量：EUCAST为1至5×10⁵CFU/ml，CLSI为0.5至2.5×10³CFU/ml，在37℃孵育。结果读取时间：EUCAST，48h；CLSI，72h。浊度用分光光度法在405nm处测定，与不含药物的生长对照相比，AMB生长减少≧90%，5FC、FLC、VRC和ISA生长减少≧50%。对于MTS和SYO药敏试验，结果的读取和解释均按照说明书进行。MTS孵育72h后，在生长抑制椭圆和条带的交点处读取MIC（AMB为100%抑制，5FC和唑类药物为90%抑制），而SYO的MIC对应于AMB的第一个蓝色孔或其它药物的第一个紫色/蓝色孔。近平滑念珠菌ATCC22019和克柔念珠菌ATCC6258作为质控菌株。

表1显示AMB在CLSI和EUCAST的MIC范围从0.016至0.25μg/ml，在SYO为0.125至0.25μg/ml，在MTS为0.016至1μg/ml。CLSI、EUCAST、MTS和SYO中，ISA、VRC和AMB的GM MIC和MIC₉₀s低于5FC。MTS中MIC从0.002到0.25μg/ml间VRC和ISA的差异很大。AMB、VRC和ISA在4种方法中显示出最低的MIC，其中VRC和ISA对所有菌的MIC<0.125μg>64μg/ml），在EUCAST方法中为4、8和3.2μg/ml；在SYO中为4、8和2.9μg/ml；而在MTS中为2、32和1.6μg/ml。此外，FLC对新型隐球菌显示出较高的MIC，CLSI方法的中位数（范围）和MIC₉₀分别为4（0.063至16）和8μg/ml；EUCAST方法为4（0.125至32）和8μg/ml；SYO为2（0.25至16）和4μg/ml；MTS为4（0.125至32）和8μg/ml。

表1

表2显示了CLSI、EUCAST、SYO和MTS对每种药物的MIC的绝对和基本一致性（the absolute agreements and essential agreements ）（在1倍和2倍稀释范围内）。除CLSI和SYO的5FC（75%）、EUCAST和SYO的FLC（89%）以及EUCAST和MTS的ISA（80%）和5FC（57%）之外，所有药物的方法之间在2倍稀释度内的基本一致性>90%。除5FC与MTS在pH7（19%）外，所有方法的NWT的比例都<10%。除了EUCAST和MTS之间的ISA（13%）之外，所有药物的方法之间的极主要错误率<8%。方法之间的主要除5FC与MTS和EUCAST之间的误差（14%/16%）外，所有药物的方法间的主要误差<11%。

表2

作者分析了SYO、MTS、CLSI和EUCAST4种方法对同一实验室临床样本分离的新型隐球菌菌株MIC在1倍和2倍倍比稀释（oneand two 2-folddilutions）间的一致性。对于AMB，4种方法之间的基本一致性良好：两种BMD方法之间为82%和99%，SYO和EUCAST之间为92%和98%，SYO和CLSI之间为86%和99%，MTS和EUCAST之间为65%和90%，MTS和CLSI之间为67%和94%。对于5FC，参考方法CLSI和EUCAST之间以及CLSI、EUCAST和SYO之间在2倍稀释内的一致性很好(>92%)；然而，pH=7.0的MTS与EUCAST和CLSI之间的一致性很低（分别为57%和75%）。对于FLC，在EUCAST和CLSI方法之间获得了良好的一致性，在2倍稀释内达到94%。SYO和CLSI之间以及SYO和EUCAST之间的分别为93%和89%。对于VCZ，在BMD方法之间的分别为88%和99%。SYO和CLSI之间分别为91%和100%，SYO和EUCAST之间分别为91%和100%。MTS和EUCAST之间以及MTS和CLSI之间分别为92%和100%。MTS和CLSI之间分别为92%和100%。对于ISA来说，3种方法基本一致（100%）。

总之，CLSI和EUCAST参考方法具有良好的一致性，尽管EUCAST方法的MIC值略高，但EUCAST方法的培养时间（48h）比CLSI方法（72h）短。本研究中，MTS和SYO与参考方法都有很好的一致性（>90%），但MTS中的5FC除外，其一致性水平较低（57%-75%）。除MTS中的5FC（14%）外，所有药物和方法的检出NWT的比例<10%，与培养基的pH值无关。AMB和FLC的主要错误率较低（<3%），其它药物的错误率稍高（<8%）。需开展包括更多NWT菌株的进一步研究，以评估每个药物的检测性能。同时，了解隐球菌对抗真菌药物耐药性的分子机制非常必要，确定其耐药基因，可能会克服表型药敏试验中的问题。